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ELISA試劑盒變質(zhì)是ELISA實驗中比較常見的問題，那么，ELISA試劑盒變質(zhì)是因為什么呢？是什么影響了ELISA試劑盒質(zhì)保？一旦變質(zhì)會有什么影響呢？今天為大家詳細分析下。

1、樣本因素

標本干擾因素包括內(nèi)源性干擾因素和外源性干擾因素，前者包括類風濕因子、補體、異嗜性抗體、自身抗體、后者包括標本溶血、標本被細菌污染、標本貯存時間過長、標本凝固不全、冷凍標本的反復(fù)凍融等。

2、試劑因素

不同批次的ELISA試劑在制作過程中很難保證質(zhì)量一致，即使是通過批批檢的項目其檢測結(jié)果也存在差異，因此必須選擇和訂購長批號的試劑，并保證保存條件。 嚴格執(zhí)行這一標準可以避免因試劑批號改變而重新建立質(zhì)控體系及重新評估試劑的復(fù)雜過程，并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性；對于效期短、使用率低的試劑，應(yīng)當小量分裝，每次使用則取分裝部分即可，避免反復(fù)凍融造成試劑的失效。

3、標本復(fù)查

ELISA試劑盒手工檢測過程復(fù)雜，影響因素較多，即使室內(nèi)質(zhì)控在控，也可能因孔間差異而造成結(jié)果的差異，因此加大復(fù)查力度是保證結(jié)果準確性的可靠方法，比如對HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等項目的可疑、弱陽性標本及少見模式的檢測結(jié)果進行復(fù)查。

 4、操作因素

ELISA操作步驟復(fù)雜，操作不當將引起較大的誤差。加樣、溫育、洗滌、顯色、比色。

 5、方法學的影響

 ELISA測定模式包括以下幾種：雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競爭抑制法，其中競爭抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作時差所引起的競爭等因素的影響，結(jié)果重復(fù)性較差，質(zhì)量較難控制。

6、灰區(qū)的設(shè)置

通常情況下，ELISA定性實驗以“陽性"和“陰性"來報告結(jié)果，兩者間有一條分界線被稱為“陽性判斷值"(cut-off value，CO值)，這是定性免疫測定結(jié)果報告的依據(jù)。

 7、常表示結(jié)果的常用方法

⑴.定性測定。

⑵.半定量測定 結(jié)果一般以滴度表示。

⑶.定量測定 即用已知量的標準品作一系列稀釋后進行ELISA測定，繪制標準曲線，結(jié)果以量或單位表示。在ELISA試劑盒定量檢測中每一塊反應(yīng)板都必須繪制相應(yīng)的標準曲線。

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