ELISA試劑盒小珠通常為直徑0.6cm的圓球,表面經(jīng)磨砂處理后吸附面積大添加。
聚苯乙烯為塑料,可制成各種方式,在測定進程中,它作為載體和容器,不參與化學反響,加之它的報價,所以被廣泛選用。
zui常用的載體為微量反響板,于ELISA測定的商品也稱為ELISA板,用的規(guī)范板形是8×12的96孔式。
為便于作少數(shù)標本的查看,有制成8聯(lián)或l2聯(lián)孔條的,放入座架后,巨細與規(guī)范ELISA板一樣。
聚苯乙烯載體的形狀首要有三種:小試管、小珠和微量反響板。小試管的特征是還能兼作反響的容器,zui終放入分光光度計中比色。
作為ELISA固相載體,聚氯乙烯板的特征為質(zhì)軟板薄,可切開,價廉、但光潔度不如聚苯乙烯板。
ELISA板的特征是能夠一同進行很多標本的查看,并可在特定的比色計上靈敏讀出作用。
如今已有多種自動化儀器用于微量反響板型的ELISA查看,包含加樣、洗刷、保溫、比色等進程,對操作的規(guī)范化極為有利。
出色的ELISA板應該是吸附功用好,空白值低,孔底透明度高,各板之間和同一板各孔之間功用附近。
ELISA試劑盒免疫酶技能的首要試劑為固相的抗原或抗體、酶符號的抗原或抗體和與符號酶直接有關(guān)的酶反響底物。
可作固相載體的物質(zhì)很多,zui常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白質(zhì)的功用,抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后保存正本的免疫活性。
因而每一批號的聚苯乙烯制品在運用前須查看其功用。
常用的查看辦法為:以必定濃度的人IgG(通常為10ng/ml)包被ELISA板各孔后,每孔內(nèi)參與恰當稀釋的酶標抗人IgG抗體,保溫后洗刷,加底物顯色,間斷酶反響后別離測每孔溶液的吸光度。
控制反響條件,使各讀數(shù)在0.8擺布。計算悉數(shù)讀數(shù)的均勻值。
悉數(shù)單個讀數(shù)與均勻讀數(shù)之差應小于10%.與聚苯乙烯類似的塑料為聚氯乙烯。
在哪一種載體上陽性作用與陰性作用差異zui大,這種載體便是這一ELISA測定的zui合適的固相載體。
聚氯乙烯對蛋白質(zhì)的吸附功用比聚苯乙烯高,但空白值有時也略高。
為比照不一樣固相在某一ELISA測定中的好壞,可用以下辦法加以查驗:用別的免疫學測定辦法選出一個典型的陽性標本和一個典型的陰性標本。
ELISA試劑盒將它們別離進行一系列稀釋后,在不一樣的固相載體上按預訂的ELISA操作進程進行測定,然后比照測定作用。
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